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分析方法驗證中耐用性驗證的剖析
2023-03-17昀冠科學商城新聞編輯
對于開發出來的分析方法，需要對其進行全面的驗證，其中耐用性的驗證非常重要，分析方法的耐用性，是指在測定條件有小的變動時，測定結果不受影響的承受程度，是為了考察方法本身對于可變試驗因素的抗干擾能力，對于微小變化的理解，千人千面，到底多少算微調，多少算大的調整，對于液相色譜法中，本人對以下變動因素進行舉例解析：
一：色譜柱的選擇
在做色譜柱耐用性選擇時，需要選擇不同品牌，不同批號的色譜柱，至少篩選3個不同廠家生產的色譜柱，并且需要保證不同廠家的色譜柱系統適用性應符合要求，色譜峰出峰順序不變，目的一是為使用方便，采購方便，并且采購部門在價格上也有主動權，另一個方面有的色譜柱廠家可能某一款色譜柱停產不生產了，或者更新換代后，不一定適用樣品的檢測，因此色譜柱的選擇是非常關鍵的一項。
對于不同的檢測項目，還要具體分析，譬如，對于有關物質的檢測，往往要求幾個雜質甚至十幾個雜質的分離，因此為了保險起見，我一般選擇比較知名廠家知名品牌的色譜柱，雖然價格上會貴一些，但是質量上會更有保障一些，對于含量和溶出的檢測，色譜柱的使用頻次較多，檢測量較大，色譜柱在這里就屬于易耗品，在有些項目要求不是太嚴格，譬如只要主峰塔板數能滿足要求，重復性符合規定的情況下，我一般選擇便宜且易獲得的色譜柱，但是同樣也是需要選擇至少3個廠家的色譜柱。
二：流動相比例的驗證
首先，在反向色譜法中，流動相比例的調整，往往對樣品的檢測影響較大，流動相中有機相的比例較大，在其他條件保持不變的情況下，主峰出峰時間靠前，水相的比例較大時，出峰時間往往靠后，是因為反相色譜中，色譜柱的填料是非極性的，而流動相是極性的，根據相似相容原理，當流動相有機相比例提高后，即降低了流動相的極性，流動相的洗脫能力得到提高。所以樣品出峰會靠前。
在做含量和溶出的方法驗證時，流動相比例變化±5%，只要主峰的拖尾因子和理論塔板數能符合要求，一般對樣品的檢測結果影響不太明顯（含量的結果的變化量≤2.0%），如果不滿足要求，將流動相的比例變化收緊到±2%，繼續進行測試。
例如：甲鈷胺含量的檢測
從結果來看，流動相中有機相的比例變化±5%，系統適用性中，對照品溶液的塔板數均大于3000，含量的變化量均小于2.0%。耐用性良好。
但是對于有關物質的研究，流動相比例變化±5%，影響非常大，是因為有關物質的研究，需要關注的雜質往往有幾個甚至十幾個，在同一個體系下既要使各個雜質能有效分離，流動相中比例的變動可能導致某個雜質和相鄰的雜質不能有效分離。那么，我們在方法驗證中，怎么調整流動相的比例呢，我的做法是一般在保證一相不變的情況下，調整另一相。
舉個例子：維格列汀有關物質的檢測
流動相A又是一個比較復雜的比例，水相中既有磷酸鹽緩沖液又有水相、有機相中既有乙腈又有甲醇，那么我們現在有如下4個設計方案，把水相看做一個整體，有機相看做一個整體。將有機相的比例調整。
這樣既考慮了在流動相有微小變動的情況下，系統適用性溶液中各個雜質都能有效分離，也能保證供試品溶液中各個雜質的檢出量均小于10%，能起到驗證方法的目的。
但是，假如某個驗證的條件試驗結果數據超過要求的限度范圍內，則需要對該條件進行嚴格控制。
三：柱溫和流速耐用性范圍的考察
液相雖然經過校正，但允許存在一定的誤差，柱溫允許±1℃~2 ℃等，儀器流速誤差小，但仍然進行有±10%~20%的變動耐用性考察，因此，柱溫和流速的耐用性不需要考察太大的范圍內，柱溫一般驗證范圍為±5℃，流速一般±0.2ml/min，但是如果在驗證的過程中，發現結果不符合可接受標準，則需將柱溫范圍收緊到±2℃，流速的范圍收緊到±0.1ml/min繼續進行驗證，如果還不能符合可接受標準，則需對檢測方法進行嚴控，并在質量標準中進行說明。
四：檢測波長的耐用性考察
需要分2個方面來講，含量和溶出的耐用性考察和柱溫流速一樣，不需要太大的范圍，一般±5nm就行，這里需要重點說明的是，有關物質的耐用性考察，有關物質中，各個雜質的響應值不同，有的甚至差別很大，假如檢測波長耐用性范圍調整的過大譬如±10nm或者±5nm，會導致檢測結果差別較大，特別是一些雜質需要加校正因子，結果差別更大，就失去了驗證的意義，因此，有關物質的波長的耐用性調整為±2nm就可以了。
這樣，通過全套的耐用性的考察，將檢測方法確定下來，在正常的樣品檢測下，在耐用性變動參數范圍內改變參數均不算改變方法，達到了方法驗證的目的。
參考文獻：
［1］2020年版《中國藥典》四部分析方法驗證指導原則（9101）
［2］《藥品GMP指南》（2010年修訂）
［3］歐洲藥典質量標準的起草技術指南
滬公網安備31011502401370
