常用試劑

一 細(xì)菌培養(yǎng)試劑

LB培養(yǎng)基   NaCl 　　　　　　　　　　　10 g   Yeast extract 　　　　　　 5 g
   Peptone 　　　　　　　　　 10 g
   Add dH2O to 　　　　　　   1000 ml
   Aliquot to 500ml flasks (250 ml per flask). Seal with sealfilm
   and autoclave them. Store at room temperature.

LA固體培養(yǎng)基   NaCl 　　　　　　　　　　　10 g
   Yeast extract 　　　　　　 5 g   Peptone 　　　　　　　　　 10 g   Agar powder 　　　　       13 ～ 15 g   Add dH2O to 　　　　　　   1000 ml   Aliquot to 500 ml flasks (250 ml per flask). Seal with sealfilm   and autoclave them. Store at room temperature.X-gal (20mg/ml) ：   20mg X-gal 溶于 1ml 二甲基甲酰胺中， -20 ℃避光保存；IPTG (200mg/ml) ：   1g IPTG 溶于 4ml 去離子雙蒸水中，定容至 5ml ，過(guò)濾滅菌后 -20 ℃保存；Amp （ 100mg/ml ）：
   1g Amp 溶于 4ml 去離子滅菌雙蒸水中，定容至 5ml ， -20 ℃保存
二 質(zhì)粒抽提試劑

Solution ΙCell resuspension solution (50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 10 mM EDTA, RNase A 100 μg/ml)
    1 M Tris-HCl (pH 7.6) 　　　　　　　　　　　 2.5 ml
    0.25 M EDTA 　　　　　　　　　　　 　　　　  2.0 ml
    ddH2O 　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　45 ml
    sterile by autoclave
    add 1% RNase 　　　　　　　　　　　 　　　　 0.5ml
    store at room temperatureSolution ⅡCell lysis solution (0.2 N NaOH, 1% SDS)
    Mix 0.4 N NaOH and 2% SDS in same volume.Solution ⅢNeutralization solution (1.32 M potassium acetate, pH 5.2)
    5 M potassium acetate 　　　　　　　　　　　 13.2 ml
    ddH2O 　　　　　　　　　　　 　　　　　　　   27 ml
    adjust pH to 5.2
    add ddH2O to 　　　　　　　　　　　 　　　　  50 ml
    sterile by autoclave
    store at room temperature

三 DNA 操作試劑

1.5 × CTAB
   CTAB   　　　　　　　　　　　 15 g
   1 M Tris · Cl (pH 8.0)   　　75 ml
   0.5 M EDTA     　　　　　　　 30 ml
   NaCl     　　　　　　　　　   61.4 g
   add ddH2O to     　　　　　   1000 ml0.5 M EDTA ( pH 8.0)
   EDTA-Na·2H2O  　　　　　　   186.1 g
   NaOH   　　　　　　　　　　   20 g
   Adjust to pH 8.0
   ddH2O to 　　　　　　　　　    1000 ml
   sterilize by autoclaving1 M Tris·HCl
   　　　　　　　　　　　 pH 7.4 　　　 pH 7.6 　　　 pH 8.0
   Tris base 　　　　　　 121.1 g 　　  121.1 g 　　　121.1 g
   Concentracted HCl 　　 70 ml 　　　  64 ml 　　　  42 ml
   ddH2O to 　　　　　　　1000 ml 　　  1000 ml 　　　1000 ml
   Sterilize by autoclavingTE ( pH 8.0)
                     　　　　　　 Stock 　　　 　　　  vol.
    10 mM Tris·HCl ( pH 8.0) 　　　 　 1 M 　　　 　　　 　  10 ml
    1 mM EDTA ( pH 8.0) 　　　 　　　   0.5 M 　　　 　　　 　2 ml
    ddH2O to 　　　 　　　 　　　 　　　 　　　 　　　 　　   1000 ml
    sterilize by autoclaving10 M NH 4 Ac
   NH４Ac 　　　 385 g 　　　  770 g
   H2O to 　　   500 ml 　　　1000 ml10 × PCR buffer
                    　　stock 　　　 　　　 　　　 vol.
    500 mM KCl 　　　 　　　 2.5 M(sterilized) 　　　 　 200 ml
    100 mM Tris-HCl 　　　 　1 M pH 9.0 (sterilized)     100 ml
    1% Triton X-100 　　　 　100% 　　　 　　　 　 　　  10 ml
    ddH2O 　　　 　　　 　　　 　　　 　　　 　　　 　   690 ml
    sterilize by autoclaving5 × TBE
    Tris 　　　 　　　 　　　54 g
    Boric acid 　　 　　　   27.5 g
    0.5 M EDTA ( pH 7.9) 　　20 ml
    ddH2O to 　　　 　　　   1000 ml10 × TAE
    Tris 　　　 　　　      121.1 g 　　　   484.4 g
    EDTA(0.5 M) 　　　 　   20 ml 　　　 　  80 ml
    NaAc·3H2O 　　　 　    17 g 　　　 　　 68 g
    glacial acetic acid 　  30 ml 　　　     200 ml
    adjust to pH 8.1
    ddH2O to 　　　 　　    1000 ml 　　　   4000 mlNaOH
        　　　 　　　  10 N 　　　 　　　 4 N
    NaOH 　　　 　　　 　 400 g 　　　 　　　 160 g
    ddH2O to 　　　 　　　1000 ml 　　　 　　 1000 ml
2 N HCl
    concentrated HCl 　　　365 ml 　　　 182.5 ml
    ddH2O to 　　　 　　　 2000 ml 　　  1000 ml5 mg/ml ssDNA
   Salmon sperm DNA 　　　 1 g
   ddH2O to 　　　 　　　   200 ml0.5 M P.B (phosphate Buffer) pH 6.8
　　Na2HPO4 　　　 16.44 g 　　  131.52 g
　　NaH2PO4　　　  16.11 g 　　　128.88 g
　　ddH2O to 　　　500 ml 　　　 4000 ml20 × SSC
   NaCl 　　　 　　     175.3 g 　　　     701.2 g
   Na3Citrate 　　　    88.2 g 　　　      352.8 g
   ddH2O to 　　　 　   1000 ml 　　       4000 ml
   Sterilize by autoclaving10% SDS
   SDS 　　　　　 100 g
   ddH2O to　　　 1000 ml
   Heat to 68 ℃ to assist dissolution50 × Denhart's Solution
   Ficoll 400 　　　　　　10 g
   PVP-360 　　　　　　　 10 g
   BSA (Fraction V)　　　 10 g
   ddH2O to 1000 mlSouthern Blot Hybridization Buffer (Saghai , s Lab)
   Final conc.　　　　　　 Stock　　　　　　 Vol.
   5 × SSC　　　　　　　　　 20 ×　　　　　 　250 ml
   50 mM PB (pH 6.8) 　　　　 0.5 M 　　　　　 　 100 ml
   5 × Denhardt's 　　　　　 50 ×   　　　　　 100 ml
   2.5 mM EDTA (pH 8.0)       0.5 M               5 ml
   100 μg/ml ssDNA           5 mg/ml             20 ml
   0.4%SDS                    20%                 20 ml
   Dextran sulfate                                50 g
   ddH2O to                                       1000 ml
   (Place a beaker on a stirrer, add these solution in the order of appearance one by one. SDS should be the very last item.)Washing off Probe for Re-hybridization of Blots (I)
   Washing time: 10 min
   Final conc.　　　　　　 Stock　　　　　　 Vol.
   0.1 × SSC 　　　　　　 20 × SSC 　　　　　20 ml
   0.1% SDS 　　　　　　 　10% SDS　　　　　　 40 ml
   ddH2O to 　　　　　　 　　　　　　 　　　   4000 mlWashing off Probe for Re-hybridization of Blots (II)
   Washing time: 3 min
   Final conc.　　　　　　 Stock　　　　　　 Vol.
   0.1 N NaOH 　　　　　　　10 N NaOH　　　　　40 ml
   0.2% SDS 　　　　　　　　10% SDS 　　　　　 80 ml
   ddH2O to 　　　　　　　　　　　　　　　　  4000 mlWashing off Probe for Re-hybridization of Blots( Ⅲ )
   Washing time: 20 min
   Final conc. 　　　　　　 Stock　　　　　　  Vol.
   0.2 M Tris. ( pH 7.5) 　　1 M Tris. (pH 7.5) 　 800 ml
   0.1 × SSC 　　　　　　  20 × SSC　　　　　  20 ml
   0.2% SDS 　　　　　　 　 10% SDS　　　　　　  80 ml
   ddH2O to　　　　　　 　　　　　　 　　　　　  4000 ml
   Blue JuiceFinal conc. 　　　　　　 Stock 　　　　　　 Vol. 　　　　　　Vol.
   70% Glycerol 　　　　　　100% 　　　　　　  35 ml 　　　　　　70 ml
   0.5 × TBE 　　　　　　  5 × 　　　　　　 5 ml 　　　　　　 10 ml
   0.2% SDS 　　　　　　    10% 　　　　　　   1 ml 　　　　　　 2 ml
   20 mM EDTA 　　　　　　  0.5 M 　　　　　　 2 ml 　　　　　　 4 ml
   5 mg/ml Bromphenol Blue 　　　　　　 　　   0.25 g 　　　　　　0.5 g
   5 mg/ml Xylene cyanol 　　　　　　 　　　    0.25 g 　　　　　 0.5 g
   ddH2O to 　　　　　　 　　　　　　 　　　   50 ml 　　　　　  100 mlEB (10 mg/ml)
   ehidium bromide 　　　　　　 1 g
   ddH2O to 　　　　　　 　　　 100 ml
   Stir on a magnetic stirrer for several hours. Transfer the solution to
   a dark bottle and store at 4 ℃ .
   The concentration of work solution: 0.5 μg/μl (50 μl stock solution
   In 1000 ml dH2O).
   Decontamination of EB
   Reduce the concentration of EB < 0.5 mg/ml, add 1 volume of
   0.5 M KMnO4 ,mix carefully then add 1 volume of 2.5 N HCl,
   mix carefully and allow the solution to stand at room temperature
   for several hours. Add 1 volume of 2.5 N NaOH, mix and discard四 RNA

操作試劑

Stock Solution:     1M NaAc(PH7.0) ： 82g NaAc 先加一定量 ddH 2 O ，用 NaOH 調(diào) PH 值至 7.0 ，再用 ddH2O 定容至 1L， 滅菌
     0.5M EDTA(PH8.0)：186.1g EDTA 先加一定量 ddH 2 O，用 NaOH 調(diào) PH 值至 8.0， 再用 ddH2O 定容至 1L，滅菌
     10×MOPS buffer ：( 用 DEPC 水配，再滅菌 )     MOPS 　　 　　　   　　  41.85g     1M NaAc(PH7.0)　　 　　　   50ml     0.5M EDTA(PH8.0) 　　 　　  20ml     先加一定量 DEPC 水 ，再用 4N NaOH 調(diào) PH 至 7.0( 約加 7ml)，再用 DEPC 水定容至 1L，滅菌    1M NaH 2 PO 4 buffer ( PH7.2) ：
NaH2PO４ 　　 　　 　　 　　 　　 71g    

H３PO４(85%) 　　 　　 　　 　4ml     用滅菌的 DEPC 水定容至 1L    20×SSC：
NaCl　　 　　 　　 　　 　　　 　175.3g     

Na３Citrate 　　 　　 　　 　　　88.2g     用 ddH2O 定容至 1L， 滅菌    10%SDS：
SDS 　　 　　 　　 　　　　 　　 100.0g     用滅菌的 ddH2O 定容至 1L( 將水加熱到 68℃ 有助于溶解 )·Work Solution   Sample buffer ：    Deionized formamide 　　 　　 　　 　1000ul    10×MOPS buffer 　　 　　 　　 　　　　200ul    37% formaldehyde 　　 　　 　　 　　　 320ul   Blue juice (loading buffer)：
Glycerol 　　 　　 　　 　　 　　 　　 70ml    5×TBE 　　 　　 　　 　　 　　 　　　 10ml    10%SDS 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　 2ml    0.5M EDTA(PH8.0) 　　 　　 　　 　　4ml    Bromphenol Blue 　　 　　 　　 　　  0.5g    Xylene Cyanol 　　 　　 　　 　　 　　0.5g    加滅菌的 ddH2O 定容至 100ml   Hybridization buffer：

1M NaH2PO４buffer 　 　　 　　 　　 　500ml    0.5M EDTA(PH8.0) 　 　　 　　 　　 　　2ml    10%SDS 　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 70g    BSA 　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　10g    用滅菌的 DEPC 水定容至 1L，貯存于室溫下   洗膜液 Ⅰ：（ for 1 littre ）   20×SSC 　　 　　 　　 　　 　　 　 　100ml   10%SDS 　　 　　 　　 　　 　　 　    10ml   洗膜液 Ⅱ ： （ for 1 littre ）   20×SSC 25ml   10%SDS  10ml   洗膜液 Ⅲ：（ for 1 littre ）   20×SSC 　　5ml   10%SDS 　　 　　 　　 　　 　　 　   10ml   4×SSC ：
20×SSC 　200ml   用滅菌的 DEPC 水定容至 1L  2×SSC：20×SSC  100ml  用滅菌的 ddH2O 定容至 1L